Evaluation eines automatisierten PCR-Workflows

Am Medizinischen Infektiologiezentrum Berlin (MIB) wurde der qualitative artus CT/NG-Testkit von Qiagen im automatisierten Workflow zum qualitativen Nachweis von Chlamydia trachomatis und Neisseria gonorrhoeae (CT/NG) auf der QIAsymphony- und Rotor-Gene Q-Plattform auf seine klinische Effizienz getestet.

Hintergrund

Infektionen mit Chlamydia trachomatis und mit Neisseria gonorrhoeae gehören zu den häufigsten sexuell übertragbaren Erkrankungen (STI). CT-Infektionen verlaufen bei Männern und Frauen zu Beginn oft relativ symptomlos, können aber im Verlauf zu Unfruchtbarkeit führen und weitere STIs, z. B. HIV, begünstigen (Epidem. Bulletin RKI 46/2013 und 37/2014).
Bei Chlamydia trachomatis unterscheidet man anhand der Oberflächenstrukturen verschiedene Serovare A–C, D–K und L1–L3, die auch jeweils für unterschiedliche Krankheitsbilder verantwortlich sind. Während die Serovare A–C überwiegend in den Entwicklungsländern auftreten und ein Trachom verursachen können, das zur Erblindung führt, sind es in den Industrieländern die Serovare D–K, die zu dem oben beschriebenen überwiegend asymptomatischen Verlauf führen können. Die Serovare L1–L3 sind als Auslöser von Lymphogranuloma venereum und Elephantiasis bekannt. Zumindest für die Serovare D–K gilt, dass sich die Infektion mit Doxycyclin als Standardtherapie relativ problemlos behandeln lässt, wodurch das Screening einen besonderen Stellenwert bekommt (RKI Epidem. Bulletin, 37/2014).
Neisseria gonorrhoeae gehört zu den gramnegativen Diplokokken, die eine bei 30–80% der Frauen und 5% der Männer nahezu asymptomatisch verlaufende Infektion hervorrufen. Besonders rektale Infektionen bei Männern verlaufen oft symptomlos. Die Gonokokken entwickeln zunehmend Resistenzen, sodass neben dem Screening mit NAT-Verfahren möglichst eine Kultur zur Ermittlung des Antibiogramms angelegt werden sollte.

Studienkonzept

Das privatwirtschaftlich organisierte MIB ist auf Infektiologie mit einem Schwerpunkt im Bereich HIV und Hepatitis spezialisiert. Neben der üblichen Labordiagnostik bietet es die Bestimmung des Immunstatus (Differenzierung der Lymphozytensubpopulationen), den direkten Erregernachweis mittels NAT (qualitativ und Viruslast) und genotypische Analysen viraler Resistenzen (HIV, HBV, HCV) an.
Für die Studie wurden am MIB 400 Proben retrospektiv untersucht, davon 50% Abstrich- und 50% Urinproben, die alle in Abbott Multi Collect Tubes gesammelt wurden. Als Referenztest diente der Abbott m2000sp/rt-Assay. Bedingt durch den Laborschwerpunkt HIV und Hepatitis besteht die Mehrzahl der Einsender bis heute aus Praxen mit dem Patientenkollektiv MSM (Männer, die Sex mit Männern haben) oder iv-Drogengebrauchern. In dieser Kohorte sind höhere Raten an STI („sexuell transmitted infections“) beschrieben. Zurzeit befinden sich unter den Einsendern lediglich zwei gynäkologische Praxen, die aufgrund der entsprechenden Richtlinien zur Mutterschaftsvorsorge nahezu ausschließlich Urinproben zum Screening auf Chlamydia trachomatis einsenden. Daher stammen die untersuchten Abstrichproben ausschließlich von männlichen Patienten (s. auch Tab. 1).

Testkits
Die beiden hier gegenübergestellten Testkits weisen mit Hilfe der PCR im Falle von CT zwei, im Falle von NG eine für den Erreger typische DNA-Sequenz(en) nach.
Testkit artus CT/NG QS-RGQ
CT-PCR: ein Einzelkopie-Ziel „momp = major outer membrane proteine“ und eine Sequenz in einem „cryptic plasmid” (CP), 5–10 Kopien pro Zelle
NG-PCR: eine Zielregion in einem Multikopie-ORF (open reading frame) des NG-Genoms (5–10 Kopien/Zelle), Funktion unbekannt
Testkit Abbott RealTime CT/NG
CT-PCR: unterschiedliche Anteile des „cryptic plasmid” (CP), 5–10 Kopien pro Zelle
NG-PCR: eine Zielregion im „OPA-Gen“ („opacity“, bis zu 11 Kopien pro Zelle)